尾靜脈途徑建立的腫瘤轉(zhuǎn)移模型僅涉及腫瘤轉(zhuǎn)移的最后階段，是實驗性轉(zhuǎn)移而非自發(fā)轉(zhuǎn)移，未能真實的反應(yīng)腫瘤細胞自發(fā)轉(zhuǎn)移的特性。與尾靜脈接種相比，乳腺原位自發(fā)轉(zhuǎn)移模型不僅真實反應(yīng)了腫瘤細胞在體的轉(zhuǎn)移特性，而且能完整地呈現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移的全過程，為探討腫瘤轉(zhuǎn)移的生物學(xué)機制和抗轉(zhuǎn)移治療提供了理想的動物模型，利用這種模型和活體動物體內(nèi)光學(xué)成像系統(tǒng)可以實現(xiàn)活體、動態(tài)和即時的轉(zhuǎn)移腫瘤分析。

66c14與4T1和4T07細胞模型比較。將Luc標記的4T1、66c14、4T07細胞對BALB／c小鼠乳腺原位接種4T1細胞乳腺原位移植瘤最大，66c14細胞瘤體次之，4T07細胞瘤體最小；接種后35 d，三株細胞乳腺原位移植瘤大小較一致。4T1和66c14原位移植瘤均可發(fā)生轉(zhuǎn)移，其中4T1細胞較66c14細胞轉(zhuǎn)移最為嚴重，而4T07細胞未見轉(zhuǎn)移。

該小動物模型飼養(yǎng)在清潔級動物中，微生物處于監(jiān)控狀態(tài)，動物房有相應(yīng)的保護措施，小鼠不會出現(xiàn)逃逸，不會對外界環(huán)境造成影響。

1. 4T1-Luc小鼠乳腺癌細胞原位接種

本模型將Luc基因轉(zhuǎn)染到小鼠乳腺癌細胞4T1中得到了高表達luciferase細胞株。取0.1 mL 4T1-Luc細胞懸液接種于BALB／c小鼠右側(cè)第二對乳腺脂肪墊內(nèi)。用活體熒光成像系統(tǒng)連續(xù)觀察，發(fā)現(xiàn)7d能夠成瘤，21d腫瘤面積顯著增大，35d后原位腫瘤面積變小，但能夠觀察到肺轉(zhuǎn)移（圖1）。

2.原位接種細胞劑量與肺轉(zhuǎn)移

標記細胞稀釋成1×107細胞／mL，2×107細胞／mL，5×107細胞／mL和1×108細胞／mL四種劑量，取0.1 mL接種于BALB／c小鼠右側(cè)第二對乳腺脂肪墊內(nèi)，制作小鼠原位乳腺癌模型，比較腫瘤細胞在小鼠體內(nèi)生長及肺轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果，四種劑量細胞接種BALB／c小鼠后，均有腫瘤生長，但四種劑量接種的原位移植瘤均發(fā)生轉(zhuǎn)移程度不同，最終確定接種1×106個細胞／只不僅肺轉(zhuǎn)移明顯，而且存活時間一般超過45 d，比高劑量接種存活時間長，為最佳肺轉(zhuǎn)移劑量（見圖2）。

1. 表達載體構(gòu)建：構(gòu)建chicken β-actin-luc-NEO載體。CAG啟動子由巨細胞病毒（thecytomegalovirus，CMV)早期增強子（earlyenhancer element）和雞β-肌動蛋白（ chickenbeta-actin ）啟動子組成，用于驅(qū)動基因在哺乳動物載體的高水平表達（圖1）。

2. 4T1-LUC熒光細胞系的獲得：采用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染小鼠乳腺癌細胞4T1細胞，轉(zhuǎn)染后24 h，用含有G418的培養(yǎng)液篩選細胞三周，獲得穩(wěn)定表達luciferase的細胞株，選擇其中高表達的克隆株擴大培養(yǎng)。

3.腫瘤細胞的植入及活體熒光成像：收集處于生長對數(shù)期的轉(zhuǎn)染細胞，稀釋至5×106／mL。取0.1 mL細胞懸液接種于BALB／c小鼠（5周齡，體重15-18 g）右側(cè)第二對乳腺脂肪墊內(nèi)。1×106個細胞/只，接種后每隔一周，采用活體熒光影像系統(tǒng)攝像動態(tài)觀察腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移情況。觀察前每只小鼠腹腔注射熒光素底物(1.5 mg/10 g)，飽和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放人活體熒光影像系統(tǒng)攝像，Slide Book 4．0軟件進行分析。

女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌（breast cancer）是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，容易脫落。癌細胞一旦脫落，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。

早期乳腺癌往往不具備典型的癥狀和體征，不易引起重視，常通過體檢或乳腺癌篩查發(fā)現(xiàn)。乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變、乳頭、乳暈異常、腋窩淋巴結(jié)腫等為乳腺癌的典型體征。

小鼠乳腺癌細胞4T1來自ATCC，是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。 當注射到BALB/c 小鼠中時，4T1自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺，肝，淋巴結(jié)和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶。 誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近。

細胞接種動物為BALB/c小鼠，BALB/c 是白色變種實驗室用鼠，起源于小家鼠Mus musculus，廣泛用于免疫學(xué)、生理學(xué)的動物實驗。